細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺(tái)，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

DMEM是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養(yǎng)基，是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的。與MEM比較增加了各種成分用量，同時(shí)又分為高糖型（4500mg/L）和低糖型(1000mg/L)。

DMEM是 dulbecco's modified eagle medium的縮寫(xiě)，所以其特點(diǎn)主要包括以下：

（1）氨基酸含量為依格爾培養(yǎng)基的2倍，

（2）維生素含量為依格爾培養(yǎng)基的4倍；

（4）含有微量的鐵離子。

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；?

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來(lái)水沖洗即可。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過(guò)夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠白介素1受體拮抗劑(IL-1Ra)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human sialic acid (SA) ELISA Kit 人唾液酸(SA)試劑盒

HumaniactParathormone,i-PTHELISAKit 人全段甲狀旁腺素(i-PTH)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humancardiacankyriepeatdomain1,ANKRD1試劑盒人心肌錨蛋白重復(fù)域1(ANKRD1)試劑盒規(guī)格：96T/48T

重組腺病毒載體轉(zhuǎn)染試劑盒10次

HumanSolubleClusterofdiffereiation38,sCD38ELISAKit人可溶性CD38(sCD38)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)試劑盒 ，英文名： IGFBP3 ELISA Kit

Mouse visceral adipose specific serine protease inhibitor (vaspin) ELISA Kit 小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白酶抑制劑(vaspin)試劑盒

MouseVascularEndothelialcellGrowthFactor,VEGFELISAKIT 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanCyclicAMPresponseelemebindingprotein,CREBELISAKit人cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白

細(xì)胞AX1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitALP-B大鼠骨特異性堿性0酸酶B

小鼠骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞髓鞘糖蛋白抗體(OMgp-Ab)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

鈉通道蛋白11α抗體

中性酯水解酶1抗體

PECAM1重組小鼠 CD31 / PECAM-1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

BDNF (Brain-derived Neurotrophin factor 0.5mgBDNF (Brain-derived Neurotrophin factor) 腦源神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(腦衍化神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子)(多肽片斷抗原)

IGF1重組人 IGF1 / IGF-I 蛋白 Protein

GADD45A Protein Human 重組人 GADD45A / DDIT-1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

TN屬

DMEM 低糖培養(yǎng)基ATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide 0.5mgATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide) ATP酶通道蛋白抗原

FGFR4 Protein Human 重組人 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白

CNTNAP2重組小鼠 CNTNAP2 / CASPR2 蛋白 Protein

IL25 Protein Rat 重組大鼠 Interleukin 25 / IL25 / IL17E 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

ENPP2重組人 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白 Protein