?無菌操作?：細胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進行，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實驗人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無菌、無污染，使用前需進行無菌檢測。不同細胞對培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動物細胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測?：定期對細胞進行支原體、細菌、真菌等污染檢測。

MEM 培養(yǎng)基

Minimum Essential Medium（MEM）

也稱必需培養(yǎng)基，它僅含有12種必和8種維生素。成分簡單，可廣泛適應(yīng)各種已建成細胞系和不同地方的哺乳動物細胞類型的培養(yǎng)。MEM-Alpha一般用于培養(yǎng)一些難培養(yǎng)細胞類型，而其它沒有特殊之處的細胞株則幾乎均可采用MEM來培養(yǎng)。

運輸和保存

運輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個月；?

注意僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

復(fù)蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準(zhǔn)備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；

3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復(fù)溫晃動凍存管以提高復(fù)溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準(zhǔn)備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準(zhǔn)備一個 T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細胞傳代建議一傳二）

1) 當(dāng)細胞匯合度達到 85%以上時，可進行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準(zhǔn)備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細胞，將重懸后的細胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

小鼠7α-羥化酶(CYP7A1)試劑盒 96T/48T

Human placeal alkaline phosphatase (PLAP) ELISA Kit 人胎盤堿性0酸酶(PLAP)試劑盒

Humanai-thrombieceptor,AELISAKit 人抗受體(A)試劑盒 96T/48T 進口分裝

humanAzidothymidine,AZT試劑盒人(AZT)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物源性飼料處理試劑盒20次

Humahrombin-aithrombincomplex,TATELISAKit人抗復(fù)合物(TAT)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠胰腺再生蛋白Iα(REG1α)試劑盒 ，英文名： REG1α ELISA Kit

Mouse endotoxin (ET) ELISA Kit 小鼠內(nèi)毒素(ET)試劑盒

MouseansformingGrowthfactorβ1,TGF-β1ELISAkit 小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforHumanD-Dimer,D2DELISAKit人D二聚體

細胞AMPK激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitPPAR-α大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α

微量DNA凝膠回收試劑盒   50T

MiniELGelExactionKit   100T

微量樣品   50T

MiniEleDNAKit   100T

磷酯酶Cγ1抗體

粘蛋白19抗體

GP120重組人類免疫缺陷病毒Ⅰ型 HIV-1 gp120 蛋白 (group P, strain RBF168) Protein

TGF- Beta R2 peptide 轉(zhuǎn)移生長因子β受體2(多肽抗原 0.5mgTGF- Beta R2 peptide 轉(zhuǎn)移生長因子β受體2(多肽抗原)

ANGPTL5重組人 ANGPTL5 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein

GHRH Protein Human 重組人 GHRH 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

CEACAM6 Protein Human 重組人 CEACA屬

MEM 培養(yǎng)基CK19 細胞角蛋白19抗原 0.5mgCK19 細胞角蛋白19抗原

HIST2H2BE Protein Human 重組人 Histone cluster 2 H2BE / HIST2H2BE 蛋白

IGFBP4重組小鼠 IGFBP4 蛋白 Protein

S100A6 Protein Mouse 重組小鼠 S100A6 蛋白

IDH1重組人 IDH1 蛋白 Protein