細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺(tái)，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

產(chǎn)品介紹

Minimum Essential Medium（MEM）

也稱必需培養(yǎng)基，它僅含有12種必需氨基酸、和8種維生素。成分簡(jiǎn)單，可廣泛適應(yīng)各種已建成細(xì)胞系和不同地方的哺乳動(dòng)物細(xì)胞類型的培養(yǎng)。MEM-Alpha一般用于培養(yǎng)一些難培養(yǎng)細(xì)胞類型，而其它沒有特殊之處的細(xì)胞株則幾乎均可采用MEM來培養(yǎng)。

培養(yǎng)基主要成份表

（+）  1000mg/L D-葡萄糖

（+）  2200mg/L NaHco3

（+）  Earle’s 平衡鹽

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；?

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠(CH)試劑盒 96T/48T

Human placeal lactogen (PL) ELISA Kit 人胎盤泌乳素(PL)試劑盒

Humahrombin-aithrombincomplex,TATELISAKit 人抗復(fù)合物(TAT)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanazurocidin,AZU試劑盒人天青殺素(AZU)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物源性飼料大豆試劑盒20次

Humahrombin，TMELISAKit人(TM)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠乙醇脫氫酶1(ADH1)試劑盒 ，英文名： ADH1 ELISA Kit

Mouse terminal compleme complex C5b-9 (TCC C5b-9) ELISA Kit 小鼠末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)試劑盒

MouseSomalcellderivedfactor1β,SDF-1βELISAkit 小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumandecay-acceleratingfactor,DAFELISAKit人降解加速因子

細(xì)胞Akt3/PKBγ激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

PPAR-γ大鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ

脫氧膽酸   10g

DeoxycholicAcid,SodiumSalt   50g

焦碳酸二乙脂   10ml

DEPC   100ml

磷脂酸磷酸酶LPIN2抗體

早期發(fā)育調(diào)控蛋白1/EDR1抗體

TSPAN7重組食蟹猴 TALLA-1 / TSPAN7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

IL-23R(Interleukin-23 receptor 0.5mgIL-23R(Interleukin-23 receptor) 白介素-23受體抗原

PKM重組人 PKM2 / OIP3 蛋白 Protein

DPEP2 Protein Human 重組人 DPEP2 / MBD-2 蛋白

CD59A Protein Mouse 重組小鼠 CD59a / Protectin / MAC-IP 蛋白 (F屬

MEM（無(wú)酚紅 ） 培養(yǎng)基PAR-2 (Protease-activated receptors-2 0.5mgPAR-2 (Protease-activated receptors-2) 蛋白酶激活受體-2抗原

CCL20 Protein Human 重組人 CCL20 / MIP-3 alpha 蛋白

HA重組甲型流感 H7N3 (A/turkey/Italy/214845/2002) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

AZU1 Protein Human 重組人 AZU1 / Azurocidin 1 / CAP37 蛋白

SUV420H2重組人 SUV420H2 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein