細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

小鼠原代眼外肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持小鼠原代眼外肌成纖維細(xì)胞最佳的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含小鼠原代眼外肌成纖維細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用小鼠原代眼外肌成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

GFP 綠色熒光蛋白 0.5mgGFP 綠色熒光蛋白

CDK2AP2 Protein Human 重組人 CDK2AP2 蛋白

F11R重組大鼠 JAM-A / F11R 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CDNF Protein Mouse 重組小鼠 CDNF / ARMETL1 蛋白

IL1B重組人 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (pro form, His 標(biāo)簽) Protein

豬圓環(huán)病毒2型抗體ELISA試劑盒

People four arachidonic acid (AA) ELISA Kit 人花生四烯酸(AA)試劑盒

RabbitPlateletFactor4,PF-4ELISAKit 兔子血小板因子4(PF-4/CXCL4)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAPC(HumanactivatedproteinC)ELISAKit人活化蛋白C

血清脊髓過氧化酶(MPO)活性高質(zhì)敏感比色法定量試劑盒20次

Porcineierleukin3,IL-3ELISAKit豬白介素3(IL-3)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠仙臺病毒（Sendai）試劑盒   96T/48T

小鼠細(xì)小病毒（CPV）試劑盒   96T/48T

小鼠細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)試劑盒   96T/48T

小鼠細(xì)胞周期素D2(Cyclin-D2)試劑盒   96T/48T

小鼠(Pepsin)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human phospholipase C gamma chain (PLC 1) ELISA Kit 人0酯酶Cγ鏈(PLCγ1)試劑盒

HumanNa+/H+exchanger3,NHE3ELISAKit 人Na+/H+交換體3(NHE3)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

ChickenIerleukin2,IL-2試劑盒雞白介素2(IL-2)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞HISTONEH3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次

Mouseglamicaciddecarboxylaseaoaibody,GAD-AbELISAKit小鼠谷脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)試劑盒規(guī)格：96T/48T

信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子4抗體

NOMO蛋白抗體

小鼠原代眼外肌成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基F11R重組大鼠 JAM-A / F11R 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

GFP 綠色熒光蛋白 0.5mgGFP 綠色熒光蛋白

IL1B重組人 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (pro form, His 標(biāo)簽) Protein

CDK2AP2 Protein Human 重組人 CDK2AP2 蛋白

CDNF Protein Mouse 重組小鼠 CDNF / ARMETL1 蛋白